l 細胞鑒定

種屬鑒定已通過

l 細胞來源

國家資源庫

l 細胞背景

1939年3-甲基膽蒽顱內注射誘導Gl261腫瘤，經C57BL/6小鼠體內培養，經同基因小鼠株連續移植維持，于1990年代中期建立體外生長細胞培養;文獻中描述了攜帶TP53和KRAS突變的細胞。

l 細胞特性

1） 來源：小鼠，膠質瘤

2） 形態：貼壁生長，膠質細胞，成纖維細胞樣

3） 含量：>1x106 細胞數

4） 規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5）用途：僅供科研使用。

l 培養條件：

1）準備DMEM 基礎培養基 (推薦：awcell-0001)             87%

      優質胎牛血清                                                                   10%

      GlutaMAX-1谷氨酰胺  (推薦：awcell-0900 )        1%

      HEPES 1M Buffer solution (推薦：awcell-01200)     1%

       P/S青霉素-鏈霉素                                                          1%.

2） 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。

l 注意事項：

對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法：

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養基來終止消化。 

3.輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的*培養基以保持細胞的生長活力，后續傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。

3）細胞凍存: 收到細胞后建議在培養前3代時凍存一批細胞種子以備后續實驗使用。

l 運輸形式：

低溫：（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇，若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯系。

常溫（2） T25瓶復蘇的存活細胞常溫發貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

l 生物安全：

1. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2. 建議在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉化成氣相可能導致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產生飛揚的碎屑造成人員傷害。